目前，常用的****方法多采用物理方法(如干熱**法、濕熱**法、過濾**法、射線**法等)和化學(xué)方法(**劑、***)兩大類。

1.干熱**法

是利用恒溫干燥箱內(nèi)160℃～170℃的高熱，并保持90～120分鐘，殺死**和芽孢，達(dá)到**目的的一種方法。主要適用于不便在壓力蒸汽**器中進(jìn)行**，且不易被高溫?fù)p壞的玻璃器皿、金屬器械以及不能和蒸汽接觸的物品的**。用此方法**的物品干燥，易于貯存。酒精燈火焰燒灼**法也是屬于干熱**的方法之一，在進(jìn)行微生物檢測工作時，常須利用工作臺面上的酒精燈火焰對金屬器具及玻璃器皿口緣進(jìn)行補充**。

2.濕熱**法

壓力蒸汽濕熱**法是目前*常用的一種**方法。它利用高壓蒸汽以及在蒸汽環(huán)境中存在的潛熱作用和良好的穿透力，使菌體蛋白質(zhì)凝固變性而使微生物死亡。適合于布類工作衣、各種器皿、金屬器械、膠塞、蒸餾水、棉塞、紙和培養(yǎng)基的**。高壓蒸汽**器的蒸汽壓力一般調(diào)整為0.10-0.11MPa，維持20～30min即可達(dá)到**效果。

3.射線**法

利用紫外線燈進(jìn)行照射**的方法。紫外線是一種低能量的電磁輻射，可以殺滅多種微生物。紫外線的作用機(jī)制是通過對微生物的核酸及蛋白質(zhì)等的破壞作用而使其滅活。適合于實驗室空氣、地面、操作臺面**。**時間為30min。用紫外線**時應(yīng)注意，不能邊照射邊進(jìn)行實驗操作，因為紫外線不僅對人體皮膚有傷害，而且對培養(yǎng)物及一些試劑等也會產(chǎn)生**影響。

4.過濾**法

是將液體或氣體通過有微孔的濾膜過濾，使大于濾膜孔徑的**等微生物顆粒阻留，從而達(dá)到**的方法。過濾**法大多用于遇熱易發(fā)生分解、變性而失效的試劑、酶液、血清、培養(yǎng)基等。

目前，常用微孔濾膜金屬濾器或塑料濾器正壓過濾**，或用玻璃**濾器、濾球負(fù)壓過濾**。濾膜孔徑應(yīng)在0.22～0.45μm范圍內(nèi)或用更小的**濾膜，溶液通過濾膜后，**和孢子等因大于濾膜孔徑而被阻，并利用濾膜的吸附作用，阻制小于濾膜孔徑的**透過。

5.化學(xué)**劑**法

用于那些不能利用物理方法進(jìn)行**的物品、空氣、工作面、操作者皮膚、某些實驗器皿等。常用的化學(xué)**劑包括甲醛、高錳酸鉀、70%～75%乙醇、過氧乙酸、來蘇爾水、0.1%新潔爾滅、環(huán)氧乙烷、碘伏或碘酊等。其中利用70%～75%乙醇、0.1%～0.2%氯化汞、10%次氯酸鈉、飽和漂白粉等進(jìn)行實驗材料的**；利用甲醛加高錳酸鉀[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]或乙二醇(6mL/m3)等加熱熏蒸法進(jìn)行無菌室和培養(yǎng)室的**。在使用時應(yīng)注意**，特別是用在皮膚或?qū)嶒灢牧仙系?*劑，須選用合適的藥劑種類、濃度和處理時間，才能達(dá)到**和**的目的。

6.***抑菌法

主要用于培養(yǎng)基，是培養(yǎng)過程中預(yù)防微生物污染的重要手段以及作為微生物污染不嚴(yán)重時的“急救”措施。常用的***有青霉素、鏈霉素和新霉素等。

1.無菌操作室**

由于無菌操作室的污染來源主要是空氣中的**和**孢子，因此長期停用后的無菌操作室應(yīng)進(jìn)行熏蒸**，熏蒸是用高錳酸鉀+甲醛[(2mL甲醛+1g高錳酸鉀)/m3]進(jìn)行無菌室的**。經(jīng)常使用的無菌操作室，在每次使用前都應(yīng)進(jìn)行地面衛(wèi)生清潔，并用紫外線燈照射30min，進(jìn)行空氣**。對超凈工作臺，每次操作前用紫外燈照射30min，然后用70%～75%酒精擦拭。

2.培養(yǎng)液**

培養(yǎng)液在制備過程中帶有各種雜菌，分裝后應(yīng)立即**，至少也應(yīng)在4小時內(nèi)完成**工序。目前常用過濾**法除去培養(yǎng)物操作液和培養(yǎng)液中的**。或?qū)ε囵B(yǎng)液中耐熱組分先進(jìn)行高壓蒸汽**，然后在無菌室加入經(jīng)過過濾**的不耐熱溶液，混勻后分裝備用。

使用高壓蒸汽**器**時，將分裝好的培養(yǎng)液放入底部有一定量(淹沒加熱管)涼水的高壓蒸汽**器內(nèi)，增壓至0.035~0.040 MPa時排凈**器內(nèi)冷空氣，以便使蒸汽能到達(dá)各個**部位，保證****徹底。然后繼續(xù)加壓加熱，當(dāng)壓力表讀數(shù)達(dá)到0.10~0.11MPa為121℃，保持15~20min即可。由于****效果取決于溫度而不是壓力，所以在一定壓力下保持較長的****時間是必須的。

在121℃的蒸汽溫度下可以很快殺死各種**及高度耐熱的芽孢桿菌，因此許多培養(yǎng)液的****壓力、溫度一般保持在0.10~0.11MPa、121℃。****時間與需要****的培養(yǎng)液量密切相關(guān)(表1)，時間不足達(dá)不到**效果，時間過長培養(yǎng)液內(nèi)的一些化學(xué)物質(zhì)遭到破壞，影響培養(yǎng)液成分。****結(jié)束后，關(guān)閉熱源，只有當(dāng)**器內(nèi)壓力降為零時才能打開放氣閥，排除剩余蒸汽，取出培養(yǎng)液。不可在壓力較高時打開放氣閥，引起減壓沸騰，使容器中液體溢出。培養(yǎng)液組成中如含有遇熱易分解的物質(zhì)，則需用過濾方法****。首先對培養(yǎng)液中耐熱組分進(jìn)行高壓蒸汽**后放置在無菌場所，固體培養(yǎng)液在40℃左右瓊脂即將凝結(jié)前，加入經(jīng)過過濾**的不耐熱溶液，混勻后冷卻備用。

3.玻璃器皿、塑料器皿和器械**

玻璃器皿可進(jìn)行干熱**或高壓蒸汽**，但在蒸汽**后*好及時烘干水分。對不能進(jìn)行高壓蒸汽**的塑料器皿可用75%酒精浸泡，使用前在無菌操作臺面上晾干的同時，用紫外線重復(fù)**。實驗室還可以用環(huán)氧乙烷**袋對塑料器皿進(jìn)行**，**后的器皿要充分散氣2～4小時后才可使用。無菌操作所用的各種器械，一般采用干熱或高壓蒸汽**，或用75%酒精浸泡，然后在無菌操作臺面上晾干的同時再用紫外線重復(fù)**；在使用期間可多次對其進(jìn)行酒精燈火焰灼燒**。

4.培養(yǎng)材料的****

采自動物機(jī)體的實驗材料，攜帶著微生物及雜質(zhì)，接種前須進(jìn)行表面****，對內(nèi)部已受微生物侵染的材料應(yīng)予以淘汰。從動物機(jī)體采集的某些組織塊，須用**劑進(jìn)行浸泡處理，進(jìn)行表面**。常用**劑有過氧化氫(10~12%，浸泡5~15 min)、過氧乙酸(0.05%，浸泡30s~1min)、酒精(70~75%，浸泡2 min)。

撰寫驗證方案及制定評估標(biāo)準(zhǔn)。

確認(rèn)**設(shè)備技術(shù)資料齊全、安裝正確，并能處于正常運行。

確認(rèn)關(guān)鍵設(shè)備控制儀表在規(guī)定的參數(shù)范圍內(nèi)能正常運行。

采用被**物品或模擬物品進(jìn)行重復(fù)實驗確認(rèn)**效果符合規(guī)定。

完善文件記錄，撰寫驗證報告。

關(guān)鍵參數(shù)應(yīng)在驗證確定的范圍內(nèi)：溫度、壓力、時間、濕度、**氣體濃度、輻照劑量等。

**程序定期驗證，時效不超過半年。

**設(shè)備或程序發(fā)生變更重新進(jìn)行驗證。

**效果與**前產(chǎn)品污染程度及污染菌特性有關(guān)，把握微生物污染水平及污染菌耐受性，注意各個環(huán)節(jié)降低污染程度。

**冷卻階段防止已**物品再次污染。

適用生物指示劑、化學(xué)指示劑等監(jiān)控**結(jié)果。

基本要求：

菌種的耐受性應(yīng)大于需**產(chǎn)品中所有可能污染菌的耐受性。

菌種應(yīng)無致病性。

菌株應(yīng)穩(wěn)定，存活期長，易于保存。

易于培養(yǎng)。若使用休眠孢子，孢子含量在90%以上。

濕熱**：嗜熱脂肪芽孢桿菌孢子（ATCC7953等，活孢子數(shù)為5×105～5×106個/片)。

干熱**：枯草芽孢桿菌孢子（ATCC9372等，活孢子數(shù)為5×105～5×106個/片)。

輻射**：短小芽孢桿菌孢子（ATCC27142等，活孢子數(shù)為5×107～5×108個/片)。 

高壓蒸汽**法：用高溫加高壓**，不僅可殺死一般的**，對**芽胞也有殺滅效果，是*可靠、應(yīng)用*普遍的物理**法。主要用于能耐高溫的物品，如金屬器械、玻璃、搪瓷、敷料、橡膠及一些**和部分培養(yǎng)基的**。